De vierde van negen kinderen, Ambrose Everett Burnside, werd op 23 mei 1824 geboren in Edghill en Pamela Burnside of Liberty, Indiana. Zijn familie was kort voor zijn geboorte uit South Carolina naar Indiana verhuisd. Omdat ze lid waren van de Society of Friends, die zich tegen slavernij verzetten, hadden ze het gevoel dat ze niet langer in het Zuiden konden leven. Als jonge jongen ging Burnside naar Liberty Seminary tot de dood van zijn moeder in 1841. Burnside's vader stopte zijn opleiding in een lokale kleermaker.
Burnside leerde het vak en verkoos in 1843 de politieke connecties van zijn vader te gebruiken om een afspraak te krijgen bij de Amerikaanse Militaire Academie. Hij deed dit ondanks zijn pacifistische Quaker-opvoeding. Zijn klasgenoten namen deel aan West Point, waaronder Orlando B. Willcox, Ambrose P. Hill, John Gibbon, Romeyn Ayres en Henry Heth. Terwijl hij daar een middelmatige student bleek te zijn, studeerde hij vier jaar later af als 18e in een klas van 38. In opdracht als brevet tweede luitenant ontving Burnside een opdracht aan de 2e Amerikaanse artillerie.
Burnside werd naar Vera Cruz gestuurd om deel te nemen aan de Mexicaans-Amerikaanse oorlog en voegde zich bij zijn regiment, maar ontdekte dat de vijandelijkheden grotendeels waren beëindigd. Als gevolg hiervan kregen hij en de 2e Amerikaanse artillerie de garnizoensdienst in Mexico-Stad. Terugkerend naar de Verenigde Staten diende Burnside onder kapitein Braxton Bragg bij de 3e Amerikaanse artillerie aan de westelijke grens. Een lichte artillerie-eenheid die diende bij de cavalerie, de derde hielp de routes naar het westen te beschermen. In 1949 raakte Burnside in de nek gewond tijdens een gevecht met de Apaches in New Mexico. Twee jaar later werd hij gepromoveerd tot eerste luitenant. In 1852 keerde Burnside terug naar het oosten en nam het bevel over Fort Adams in Newport, RI.
Op 27 april 1852 trouwde Burnside met Mary Richmond Bishop of Providence, RI. Het volgende jaar nam hij ontslag bij het leger (maar bleef in de Rhode Island Militie) om zijn ontwerp voor een stuitliggende karabijn te perfectioneren. Dit wapen gebruikte een speciale koperen patroon (ook ontworpen door Burnside) en lekte geen heet gas zoals veel andere ontlastende ontwerpen van die tijd. In 1857 won de karabijn van Burnside een wedstrijd op West Point tegen een groot aantal concurrerende ontwerpen.
Door de oprichting van de Burnside Arms Company slaagde Burnside erin een contract van minister van oorlog John B. Floyd te verkrijgen om het Amerikaanse leger van het wapen te voorzien. Dit contract werd verbroken toen Floyd werd omgekocht om een andere wapenmaker te gebruiken. Kort daarna liep Burnside voor een congres als democraat en werd verslagen in een aardverschuiving. Zijn verkiezingsverlies, gekoppeld aan een brand in zijn fabriek, leidde tot zijn financiële ondergang en dwong hem om het patent voor zijn karabijnontwerp te verkopen.
Burnside vestigde zich in westelijke richting en verzekerde zich van werkgelegenheid als penningmeester van de Illinois Central Railroad. Terwijl hij daar was, werd hij bevriend met George B. McClellan. Met het uitbreken van de burgeroorlog in 1861 keerde Burnside terug naar Rhode Island en richtte de 1st Rhode Island Volunteer Infantry op. Benoemde zijn kolonel op 2 mei, hij reisde met zijn mannen naar Washington, DC en reed snel naar brigadecommando in het ministerie van Noordoost-Virginia. Hij leidde de brigade bij de First Battle of Bull Run op 21 juli en kreeg kritiek omdat hij zijn mannen stukje bij beetje pleegde.
Na de nederlaag van de Unie werd het 90-dagenregiment van Burnside buiten dienst gesteld en werd hij op 6 augustus gepromoveerd tot brigadegeneraal van vrijwilligers. Na een training in het leger van de Potomac kreeg hij het bevel over de expeditie van North Carolina Force bij Annapolis, MD. Burnside zeilde in januari 1862 naar North Carolina en won in februari en maart overwinningen op Roanoke Island en New Bern. Voor deze prestaties werd hij gepromoveerd tot generaal-majoor op 18 maart. Burnside bleef zijn positie uitbreiden tot het late voorjaar van 1862 en bereidde zich voor op een drive op Goldsborough toen hij orders kreeg om een deel van zijn commando naar Virginia te brengen.
Met de ineenstorting van de schiereilandcampagne van McClellan in juli bood president Abraham Lincoln het commando van Burnside aan het leger van de Potomac aan. Een bescheiden man die zijn beperkingen begreep, weigerde Burnside te wijzen op een gebrek aan ervaring. In plaats daarvan behield hij het bevel over IX Corps dat hij in Noord-Carolina had geleid. Met de nederlaag van de Unie bij Second Bull Run in augustus werd Burnside opnieuw aangeboden en weigerde opnieuw het bevel over het leger. In plaats daarvan werd zijn korps toegewezen aan het leger van de Potomac en werd hij commandant van de "rechtervleugel" van het leger, bestaande uit IX Corps, nu geleid door majoor-generaal Jesse L. Reno, en majoor-generaal Joseph Hooker's I Corps.
Dienend onder McClellan namen Burnside's mannen deel aan de Battle of South Mountain op 14 september. In de gevechten vielen I en IX Corps aan op de gaten van Turner en Fox. In de gevechten duwden de mannen van Burnside de Zuidelijken terug, maar Reno werd gedood. Drie dagen later tijdens de Slag om Antietam, scheidde McClellan de twee korpsen van Burnside tijdens het gevecht met Hooker's I Corps bevolen aan de noordkant van het slagveld en IX Corps beval naar het zuiden.
Verantwoordelijk voor het veroveren van een belangrijke brug aan de zuidkant van het slagveld, weigerde Burnside afstand te doen van zijn hogere autoriteit en gaf bevelen via de nieuwe commandant van het IX Corps, brigadegeneraal Jacob D. Cox, ondanks het feit dat de eenheid de enige was onder zijn directe controle. Burnside slaagde er niet in het gebied te verkennen voor andere kruispunten, en bewoog langzaam en richtte zijn aanval op de brug, wat leidde tot meer slachtoffers. Vanwege zijn traagheid en de tijd die nodig was om de brug te nemen, was Burnside niet in staat zijn succes te benutten nadat de overtocht was genomen en zijn opmars was ingehouden door generaal-majoor A.P. Hill.
In de nasleep van Antietam werd McClellan opnieuw ontslagen door Lincoln voor het nalaten van het terugtrekkende leger van generaal Robert E. Lee. Wat betreft Burnside, drukte de president de onzekere generaal op 7 november om het bevel over het leger te aanvaarden. Een week later keurde hij het plan van Burnside goed om Richmond te nemen, waarin werd opgeroepen tot een snelle beweging naar Fredericksburg, VA met als doel Lee te omzeilen. Door dit plan te initiëren, versloeg Burnside's mannen Lee naar Fredericksburg, maar verspilden hun voordeel terwijl ze wachtten op pontons om aan te komen om de Rappahannock River te kunnen oversteken.
Burnside wilde de lokale fords niet doorkruisen en stelde Lee uit om de hoogten ten westen van de stad aan te komen. Op 13 december viel Burnside deze positie aan tijdens de Slag om Fredericksburg. Afgeslagen met zware verliezen, bood Burnside aan af te treden, maar werd geweigerd. De volgende maand probeerde hij een tweede offensief dat vastliep als gevolg van zware regenval. In de nasleep van de 'moddermars' vroeg Burnside dat verschillende officieren die openlijk ongehoorzaam waren door de rechtbank zouden worden krijgsgevangen of hij zou aftreden. Lincoln koos voor het laatste en Burnside werd op 26 januari 1863 vervangen door Hooker.
Omdat hij Burnside niet wilde verliezen, liet hij hem opnieuw toewijzen aan IX Corps en het bevel voeren over het ministerie van Ohio. In april gaf Burnside de controversiële algemene orde nr. 38 uit, waardoor het een misdaad was om elke oppositie tegen de oorlog te uiten. Die zomer stonden de mannen van Burnside centraal in de nederlaag en de verovering van de geconfedereerde raider-brigadegeneraal John Hunt Morgan. Terugkerend naar aanstootgevende acties die vallen, leidde Burnside een succesvolle campagne die Knoxville, TN veroverde. Met de nederlaag van de Unie in Chickamauga werd Burnside aangevallen door het Zuidelijke korps van luitenant-generaal James Longstreet.
Door het verslaan van Longstreet buiten Knoxville eind november, kon Burnside helpen bij de overwinning van de Unie in Chattanooga door te voorkomen dat het Verbonden korps het leger van Bragg versterkte. De volgende lente werden Burnside en IX Corps naar het oosten gebracht om te helpen bij de campagne Overland Campagne van luitenant-generaal Ulysses Grant. Aanvankelijk rechtstreeks rapporterend aan Grant toen hij het leger van de commandant van de Potomac, generaal-majoor George Meade, overtrof, vocht Burnside in mei 1864 tegen de Wilderness and Spotsylvania. In beide gevallen faalde hij om zichzelf te onderscheiden en was vaak terughoudend om zijn troepen volledig te betrekken.
Na de veldslagen in North Anna en Cold Harbor, kwamen de korpsen van Burnside de belegeringslinies in Petersburg binnen. Terwijl de gevechten vastliepen, stelden mannen uit de 48ste Pennsylvania Infantry van IX Corps voor om een mijn onder de vijandelijke linies te graven en een enorme lading tot ontploffing te brengen om een opening te creëren waardoor troepen van de Unie konden aanvallen. Goedgekeurd door Burnside, Meade en Grant, ging het plan door. Burnside was van plan om een afdeling speciaal getrainde zwarte troepen te gebruiken voor de aanval en kreeg uren voor de aanval te horen dat ze witte troepen moesten gebruiken. De resulterende Battle of the Crater was een ramp waarvoor Burnside de schuld kreeg en op 14 augustus van zijn bevel werd ontheven.
Burnside heeft nooit een bevel gekregen en verliet het leger op 15 april 1865. Burnside was een eenvoudige patriot die zich nooit bezighield met de politieke plannen of ruzie die veel bevelhebbers van zijn rang gebruikten. Zich goed bewust van zijn militaire beperkingen, werd Burnside herhaaldelijk gefaald door het leger dat hem nooit commandoposities had moeten bevorderen. Terugkerend naar Rhode Island, werkte hij met verschillende spoorwegen en diende later als gouverneur en een Amerikaanse senator voordat hij op 13 september 1881 stierf aan angina..