Fosfaatgebufferde zoutoplossing of PBS-oplossing
Share
PBS of fosfaatgebufferde zoutoplossing is een bufferoplossing die bijzonder waardevol is omdat deze de ionenconcentratie, osmolariteit en pH van menselijke lichaamsvloeistoffen nabootst. Met andere woorden, het is isotoon voor menselijke oplossingen, dus het is minder waarschijnlijk dat het celbeschadiging, toxiciteit of ongewenste neerslag veroorzaakt in biologisch, medisch of biochemisch onderzoek.
PBS chemische samenstelling
Er zijn verschillende recepten om de PBS-oplossing te bereiden. De essentiële oplossing bevat water, natriumwaterstoffosfaat en natriumchloride. Sommige preparaten bevatten kaliumchloride en kaliumdiwaterstoffosfaat. EDTA kan ook worden toegevoegd bij de bereiding van cellen om klonteren te voorkomen.
Fosfaatgebufferde zoutoplossing is niet ideaal voor gebruik in oplossingen die tweewaardige kationen bevatten (Fe2+, Zn2+) omdat neerslag kan optreden. Sommige PBS-oplossingen bevatten echter calcium of magnesium. Houd er ook rekening mee dat fosfaat enzymatische reacties kan remmen. Let vooral op dit mogelijke nadeel bij het werken met DNA. Hoewel PBS uitstekend is voor fysiologische wetenschap, moet het fosfaat in een met PBS gebufferd monster neerslaan als het monster wordt gemengd met ethanol.
Een typische chemische samenstelling van 1X PBS heeft een uiteindelijke concentratie van 10 mM PO43-, 137 mM NaCl en 2,7 mM KCl. Hier is de uiteindelijke concentratie van reagentia in de oplossing:
| Zout | Concentratie (mmol / L) | Concentratie (g / L) |
|---|---|---|
| NaCl | 137 | 8.0 |
| KCl | 2.7 | 0.2 |
| na2HPO4 | 10 | 1.42 |
| KH2PO4 | 1.8 | 0.24 |
Protocol voor het maken van fosfaatgebufferde zoutoplossing
Afhankelijk van uw doel, kunt u 1X, 5X of 10X PBS voorbereiden. Veel mensen kopen eenvoudig PBS-buffertabletten, lossen ze op in gedestilleerd water en passen de pH indien nodig aan met zoutzuur of natriumhydroxide. Het is echter gemakkelijk om de oplossing helemaal opnieuw te maken. Hier zijn recepten voor 1X en 10X fosfaatgebufferde zoutoplossing:
Reagens | Bedrag toevoegen (1 ×) | Eindconcentratie (1 ×) | Toe te voegen bedrag (10 ×) | Eindconcentratie (10 ×) |
| NaCl | 8 g | 137 mM | 80 g | 1,37 M |
| KCl | 0,2 g | 2,7 mM | 2 g | 27 mM |
| Na2HPO4 | 1,44 g | 10 mM | 14,4 g | 100 mM |
| KH2PO4 | 0,24 g | 1,8 mM | 2,4 g | 18 mM |
Optioneel: | ||||
| CaCl2 • 2H2O | 0,133 g | 1 mM | 1,33 g | 10 mM |
MgCl2 • 6H2O | 0,10 g | 0,5 mM | 1,0 g | 5 mM |
- Los de reagenszouten op in 800 ml gedestilleerd water.
- Stel de pH in op het gewenste niveau met zoutzuur. Gewoonlijk is dit 7,4 of 7,2. Gebruik een pH-meter om de pH te meten, geen pH-papier of een andere onnauwkeurige techniek.
- Voeg gedestilleerd water toe om een eindvolume van 1 liter te bereiken.
Sterilisatie en opslag van PBS-oplossing
Sterilisatie is niet nodig voor sommige toepassingen, maar als u het steriliseert, breng de oplossing in porties en autoclaaf gedurende 20 minuten bij 15 psi (1,05 kg / cm2) of gebruik filtersterilisatie.
Met fosfaat gebufferde zoutoplossing kan bij kamertemperatuur worden bewaard. Het kan ook worden gekoeld, maar 5X en 10X oplossing kan neerslaan wanneer afgekoeld. Als u een geconcentreerde oplossing moet koelen, bewaar deze dan eerst op kamertemperatuur totdat u zeker weet dat de zouten volledig zijn opgelost. Als neerslag optreedt, zal het opwarmen van de temperatuur ze weer in oplossing brengen. Houdbaarheid van gekoelde oplossing is 1 maand.
Een 10X-oplossing verdunnen om 1X PBS te maken
10X is een geconcentreerde of stockoplossing, die kan worden verdund om een 1X of normale oplossing te maken. Een 5X-oplossing moet 5 keer worden verdund om een normale verdunning te maken, terwijl een 10X-oplossing 10 keer moet worden verdund.
Voeg 100 ml van de 10X-oplossing toe aan 900 ml water om een 1 liter werkoplossing van 1X PBS te bereiden uit een 10X PBS-oplossing. Dit verandert alleen de concentratie van de oplossing, niet de gram of molaire hoeveelheid van de reagentia. De pH mag niet worden beïnvloed.
PBS versus DPBS
Een andere populaire bufferoplossing is Dulbecco's fosfaatgebufferde zoutoplossing of DPBS. DPBS, zoals PBS, wordt gebruikt voor biologisch onderzoek en buffers in het pH-bereik van 7,2 tot 7,6. Het kan worden bewaard bij kamertemperatuur. De oplossing van Dulbecco bevat een lagere concentratie fosfaat. Het is 8,1 mM mM fosfaat-ionen, terwijl reguliere PBS 10 mM fosfaat is. Het recept voor 1x DPBS is:
| Reagens | Toe te voegen bedrag (1x) |
| NaCl | 8.007 g |
| KCl | 0,201 g |
| na2HPO4 | 1.150 g |
| KH2PO4 | 0,200 g |
| Optioneel: | |
| CaCl2• 2H2O | 0,133 g |
| MgCl2• 6H2O | 0,102 g |
