Margaret Tudor was de zus van koning Henry VIII, dochter van Henry VII (eerste Tudor-koning), koningin van James IV van Schotland, grootmoeder van Mary, Queen of Scots, grootmoeder ook van Mary's echtgenoot Henry Stewart, Lord Darnley en overgrootmoeder van James VI van Schotland die James I van Engeland werd. Ze leefde van 29 november 1489 tot 18 oktober 1541.
Margaret Tudor was de oudste van twee dochters van koning Henry VII van Engeland en van Elizabeth van York (die de dochter was van Edward IV en Elizabeth Woodville). Haar broer was koning Henry VIII van Engeland. Ze werd genoemd naar haar grootmoeder van moeders kant, Margaret Beaufort, wiens voortdurende bescherming en promotie van haar zoon, Henry Tudor, hem hielp hem als koningin VII naar het koningschap te brengen.
In augustus 1503 trouwde Margaret Tudor met koning James IV van Schotland, een poging om de betrekkingen tussen Engeland en Schotland te herstellen. Het gezelschap dat haar begeleidde om haar man te ontmoeten stopte bij het landhuis van Margaret Beaufort (moeder van Henry VII), en Henry VII keerde terug naar huis, terwijl Margaret Tudor en haar bedienden verder gingen naar Schotland. Henry VII slaagde er niet in om een adequate bruidsschat voor zijn dochter te verstrekken, en de relatie van Engeland en Schotland verbeterde niet zoals gehoopt. Ze had zes kinderen met James; alleen het vierde kind, James (10 april 1512) leefde tot volwassenheid.
James IV stierf in 1513 in de strijd tegen de Engelsen in Flodden. Margaret Tudor werd de regent voor hun zoontje, nu koning als James V. Het testament van haar man noemde haar als regent terwijl ze nog een weduwe was, niet hertrouwd. Haar regentschap was niet populair: ze was een dochter en zus van Engelse koningen en een vrouw. Ze gebruikte veel vaardigheid om te voorkomen dat ze als regent werd vervangen door John Stewart, een mannelijk familielid en in de rij van opvolging. In 1514 hielp ze een vrede tussen Engeland, Frankrijk en Schotland tot stand te brengen.
Datzelfde jaar, slechts het jaar na de dood van haar man, trouwde Margaret Tudor met Archibald Douglas, graaf van Angus, een aanhanger van Engeland en een van de bondgenoten van Margaret in Schotland. Ondanks de wil van haar man probeerde ze aan de macht te blijven en nam ze haar twee overlevende zonen (Alexander, de jongste, leefde toen nog, evenals de oudere James). Een andere regent werd benoemd en de Scottish Privy Council beweerde ook de voogdij over de twee kinderen. Ze reisde met toestemming binnen Schotland en maakte van de gelegenheid gebruik om onder bescherming van haar broer naar Engeland te vluchten. Ze is daar bevallen van een dochter, Lady Margaret Douglas, die later moeder zou worden van Henry Stuart, Lord Darnley.
Margaret ontdekte dat haar man een minnaar had. Margaret Tudor veranderde vrij snel van trouw en steunde de pro-Franse regent, John Stewart, de hertog van Albany. Ze keerde terug naar Schotland en betrok zichzelf in de politiek, organiseerde een staatsgreep die Albany verwijderde en bracht James aan de macht op de leeftijd van 12, hoewel dat van korte duur was en Margaret en de hertog van Angus streden voor macht.
Margaret won een nietigverklaring van Douglas, hoewel ze al een dochter hadden voortgebracht. Margaret Tudor trouwde vervolgens met Henry Stewart (of Stuart) in 1528. Hij werd later Lord Methven gemaakt kort nadat James V de macht overnam, dit keer op zichzelf.
Het huwelijk van Margaret Tudor was geregeld om Schotland en Engeland dichterbij te brengen, en ze lijkt haar toewijding aan dat doel te hebben voortgezet. Ze probeerde in 1534 een ontmoeting tussen haar zoon James en haar broer Henry VIII te regelen, maar James beschuldigde haar van het verraden van geheimen en vertrouwde haar niet langer. Hij weigerde haar verzoek om toestemming om van Methven te scheiden.
In 1538 was Margaret aanwezig om de nieuwe vrouw van haar zoon, Marie de Guise, in Schotland te verwelkomen. De twee vrouwen vormden een band rond het verdedigen van het rooms-katholieke geloof tegen de toenemende protestantse macht.
Margaret Tudor stierf in 1541 op kasteel Methven. Ze liet haar bezittingen over aan haar dochter, Margaret Douglas, naar het genoegen van haar zoon.
Margaret Tudor's kleindochter Mary, Queen of Scots, dochter van James V, werd de heerser van Schotland. Haar echtgenoot, Henry Stewart, Lord Darnley, was ook een kleinzoon van Margaret Tudor - zijn moeder was Margaret Douglas, die de dochter van Margaret was door haar tweede echtgenoot, Archibald Douglas.
Mary werd uiteindelijk geëxecuteerd door haar neef, koningin Elizabeth I van Engeland, die de nicht van Margaret Tudor was. De zoon van Mary en Darnley werd koning James VI van Schotland. Elizabeth noemde James haar erfgenaam bij zijn dood en hij werd koning James I van Engeland.