De personages in Shakespeare's Macbeth zijn grotendeels Schotse edellieden en mannen die Shakespeare uit Holinshed heeft gehaald Chronicles. In de tragedie contrasteert de meedogenloze ambitie van Macbeth en Lady Macbeth met de morele gerechtigheid van koning Duncan, Banquo en Macduff. De Drie Heksen, kwaadaardige personages op het eerste gezicht, fungeren zowel als agenten als getuigen van het lot en zetten de acties in beweging.
De dank aan Glamis aan het begin van het stuk, Macbeth is de protagonist van de gelijknamige tragedie. Hij wordt in eerste instantie gepresenteerd als een Schotse edelman en een dappere krijger, maar zijn honger naar macht en de daaropvolgende angst leidden tot zijn ondergang. Nadat hij en Banquo luisteren naar een profetie van de Drie Heksen, die hem dan van Cawdor afkondigen en vervolgens koning, wordt hij corrupt.
De vrouw van Macbeth haalt hem over om Duncan, de koning van de Schotten, te doden tijdens een bezoek aan hun kasteel in Inverness. Hij gaat door met het plan ondanks zijn twijfels en angsten en wordt koning. Door zijn acties raakt hij echter in een staat van constante paranoia, tot het punt dat hij zijn bondgenoot Banquo en MacDuff's familie heeft vermoord. Na het advies van de heksen te hebben ingewonnen, vertellen ze hem dat geen enkele man "van vrouw geboren" hem ooit zal kunnen verslaan. Hij wordt uiteindelijk onthoofd door Macduff, die 'uit zijn moeders baarmoeder was onttrokken'.
De karakterisering van Macbeth kan worden omschreven als anti-heroïsch: aan de ene kant gedraagt hij zich als een meedogenloze tiran, aan de andere kant toont hij wroeging.
Macbeth's vrouw, Lady Macbeth, is een drijvende kracht in het stuk. Ze verschijnt voor het eerst op het podium en leest een brief van haar man, die de profetie vertelt van de heksen die voorspellen dat hij koning van Schotland zou worden. Ze denkt dat de aard van haar man "te vol is van de melk van menselijke vriendelijkheid" (handeling I, scène 5) en kleineert zijn mannelijkheid. Bijgevolg dringt ze haar man aan om koning Duncan te vermoorden en alles te doen wat nodig is om tot koning van de Schotten te worden gekroond.
De daad laat Macbeth zo geschokt dat ze het bevel moet overnemen, hem vertellen hoe hij de plaats delict moet bepalen en wat hij met de dolken moet doen. Dan trekt ze zich meestal terug als Macbeth verandert in een paranoïde tiran, zo niet om hun gasten op te merken dat zijn hallucinaties niets anders zijn dan een langdurige kwaal. In handeling V raakt ze echter ook ontrafeld, nadat ze is bezweken aan wanen, hallucinaties en slaapwandelen. Uiteindelijk sterft ze, vermoedelijk door zelfmoord.
Een folie voor Macbeth, Banquo begint als bondgenoot - beide zijn generaals onder de heerschappij van koning Duncan - en ze ontmoeten de Three Witches samen. Na te hebben geprofeteerd dat Macbeth koning zal worden, vertellen de heksen Banquo dat hij zelf geen koning zal zijn, maar dat zijn nakomelingen zullen zijn. Terwijl Macbeth in de ban is van de profetie, verwerpt Banquo het en toont het over het algemeen een vrome houding - bijvoorbeeld door in de hemel om hulp te bidden - in tegenstelling tot de aantrekkingskracht van Macbeth op de duisternis. Na de moord op de koning begint Macbeth Banquo te zien als een bedreiging voor zijn koninkrijk en laat hij hem vermoorden.
Banquo's geest keert terug in een latere scène, waardoor Macbeth met alarm reageert tijdens een openbaar feest, dat Lady Macbeth oproept tot een langdurige psychische aandoening. Wanneer Macbeth terugkeert naar de heksen in handeling IV, tonen ze hem een verschijning van acht koningen die allemaal sterk op Banquo lijken, een van hen houdt een spiegel vast. De scène heeft een diepe betekenis: King James, op de troon wanneer Macbeth werd geschreven, werd verondersteld een afstammeling van Banquo te zijn, door negen generaties van hem gescheiden.
De Three Witches zijn de eerste personages die op het podium verschijnen, wanneer ze hun overeenkomst aankondigen om Macbeth te ontmoeten. Kort daarna begroeten ze Macbeth en zijn metgezel Banquo met een profetie: dat de eerste koning zal zijn en de laatste een rij koningen zal voortbrengen. De profetieën van de heksen hebben een grote invloed op Macbeth, die besluit zich de troon van Schotland toe te eigenen.
Vervolgens, op zoek door Macbeth in handeling IV, volgen de Heksen de bevelen van Hecate en roepen visioenen op voor Macbeth die zijn naderende ondergang aankondigen, eindigend met een processie van koningen die sterk op Banquo lijken.
Hoewel heksen in de tijd van Shakespeare als slechter werden gezien dan rebellen, als politieke en spirituele verraders, zijn ze in het stuk grappige en verwarrende figuren. Het is ook onduidelijk of ze het lot beheersen, of dat ze slechts de agenten zijn.
Macduff, de vrouw van Fife, fungeert ook als een folie voor Macbeth. Hij ontdekt het lijk van de vermoorde koning Duncan in het kasteel van Macbeth en slaat alarm. Hij vermoedt onmiddellijk Macbeth van regicide, dus hij woont de kroningsceremonie niet bij en vlucht in plaats daarvan naar Engeland om zich bij Malcolm, de oudste zoon van koning Duncan, aan te sluiten om hem te overtuigen terug te keren naar Schotland en de troon terug te winnen. Macbeth wil dat hij wordt vermoord, maar de huurmoordenaars nemen zijn vrouw en zijn jonge kinderen in plaats daarvan. Uiteindelijk slaagt Macduff erin Macbeth te verslaan. Hoewel niemand "van vrouw geboren" hem kon vermoorden, werd Macduff eigenlijk geboren via een keizersnede, wat hem de uitzondering op de profetieën van de heksen maakte.
De koning van Schotland symboliseert de morele orde in het stuk, waarvan de waarden worden vernietigd en hersteld naarmate de tragedie vordert. Hoewel hij vertrouwend en genereus van aard is (zijn deugden / Will pleiten als engelen, trompet-tongu'd'I 7.17-19), vooral tegenover Macbeth, is hij vastberaden in zijn bestraffing van de oorspronkelijke versie van Cawdor.
De oudste zoon van Duncan vlucht naar Engeland als hij ontdekt dat zijn vader is vermoord. Dit maakt hem schuldig, maar in werkelijkheid probeerde hij te vermijden een ander doelwit te worden. Aan het einde van het stuk wordt hij gekroond tot koning van Schotland.
Banquo's zoon, hij wordt in een hinderlaag gelokt door de moordenaars van Macbeth naast zijn vader, maar weet te ontsnappen. Hoewel hij aan het einde van het stuk niet koning wordt, weten we dat de huidige Engelse monarchie tijdens Shakespeare's tijd afstamt van Banquo.