Hoe 10X TBE elektroforese buffer te maken

TBE en TAE worden gebruikt als buffers in de moleculaire biologie, voornamelijk voor elektroforese van nucleïnezuren. Tris-buffers worden gebruikt onder enigszins basische pH-omstandigheden, zoals voor DNA-elektroforese, omdat dit het DNA oplosbaar en gedeprotoneerd in de oplossing houdt, zodat het wordt aangetrokken door de positieve elektrode en door een gel zal migreren. EDTA is een ingrediënt in de oplossing omdat dit gebruikelijke cheleringsmiddel nucleïnezuren beschermt tegen afbraak door enzymen. De EDTA cheleert tweewaardige kationen die co-factoren zijn voor nucleasen die het monster kunnen verontreinigen. Omdat het magnesiumkation echter een cofactor is voor DNA-polymerase en restrictie-enzymen, wordt de concentratie van EDTA met opzet laag gehouden (concentratie van ongeveer 1 mM).

10X TBE elektroforese buffer materialen

• 108 g Tris-base [tris (hydroxymethyl) aminomethaan]
• 55 g boorzuur
• 7,5 g EDTA, dinatriumzout
• Gedeïoniseerd water

Voorbereiding voor de 10X TBE elektroforese buffer

1. Los de Tris, boorzuur en EDTA op in 800 ml gedeïoniseerd water.
2. Verdun de buffer tot 1 L. Niet opgeloste witte klontjes kunnen oplossen door de fles met oplossing in een heet waterbad te plaatsen. Een magnetische roerstaaf kan het proces ondersteunen.

U hoeft de oplossing niet te steriliseren. Hoewel neerslag na verloop van tijd kan optreden, is de voorraadoplossing nog steeds bruikbaar. U kunt de pH aanpassen met een pH-meter en druppelsgewijs geconcentreerd zoutzuur (HCl) toevoegen. Het is prima om TBE-buffer bij kamertemperatuur op te slaan, hoewel je misschien de stockoplossing door een filter van 0,22 micron wilt filteren om deeltjes te verwijderen die neerslag zouden bevorderen.

10X TBE elektroforese bufferopslag

Bewaar de fles met 10X bufferoplossing bij kamertemperatuur. Koeling zal de neerslag versnellen.

Gebruik van 10X TBE elektroforese buffer

De oplossing wordt voor gebruik verdund. Verdun 100 ml van 10X voorraad tot 1 L met gedeïoniseerd water.

5X TBE Recept voor voorraadoplossing

Het voordeel van de 5X-oplossing is dat deze minder snel neerslaat.

• 54 g Tris-basis (Trizma)
• 27,5 gram boorzuur
• 20 ml 0,5 M EDTA-oplossing
• Gedeïoniseerd water

Voorbereiding

1. Los de Tris-base en boorzuur op in de EDTA-oplossing.
2. Stel de pH van de oplossing in op 8,3 met behulp van geconcentreerde HC1.
3. Verdun de oplossing met gedeïoniseerd water om 1 liter 5X voorraadoplossing te maken. De oplossing kan ook worden verdund tot 1X of 0,5X voor elektroforese.

Als u per ongeluk een 5X- of 10X-voorraadoplossing gebruikt, krijgt u slechte resultaten omdat er zoveel warmte wordt gegenereerd. Naast dat u een slechte resolutie krijgt, kan het monster beschadigd raken.

0.5X TBA Buffer Recept

• 5X TBE voorraadoplossing
• Gedistilleerd gedeïoniseerd water

Voorbereiding

Voeg 100 ml van de 5X TBE-oplossing toe aan 900 ml gedestilleerd gedeïoniseerd water. Voor gebruik grondig mengen.

beperkingen

Hoewel TBE en TAE gebruikelijke elektroforesebuffers zijn, zijn er andere opties voor geleidende oplossingen met een lage molariteit, waaronder lithiumboraatbuffer en natriumboraatbuffer. Het probleem met TBE en TAE is dat op Tris gebaseerde buffers het elektrische veld beperken dat kan worden gebruikt bij elektroforese omdat te veel lading een weglooptemperatuur veroorzaakt.