Hoewel de Mason-Dixon-lijn meestal wordt geassocieerd met de verdeling tussen de noordelijke en zuidelijke staten (respectievelijk vrij en slaaf) tijdens de jaren 1800 en het Amerikaanse tijdperk van de burgeroorlog, werd de lijn omstreeks 1700 afgebakend om een eigendomsgeschil te beslechten . De twee landmeters die de lijn in kaart hebben gebracht, Charles Mason en Jeremiah Dixon, zullen altijd bekend staan om hun beroemde grens.
In 1632 gaf koning Charles I van Engeland de eerste Lord Baltimore, George Calvert, de kolonie van Maryland. Vijftig jaar later, in 1682, gaf koning Karel II William Penn het grondgebied naar het noorden, dat later Pennsylvania werd. Een jaar later gaf Charles II Penn land op het schiereiland Delmarva (het schiereiland dat het oostelijke deel van het moderne Maryland en heel Delaware omvat).
De beschrijving van de grenzen in de subsidies aan Calvert en Penn kwam niet overeen en er was veel verwarring over waar de grens (vermoedelijk langs 40 graden ten noorden) lag. De families Calvert en Penn legden de zaak voor aan het Britse hof en de opperrechter van Engeland verklaarde in 1750 dat de grens tussen zuidelijk Pennsylvania en noordelijk Maryland 15 mijl ten zuiden van Philadelphia moest liggen.
Een decennium later waren de twee families het eens over het compromis en wilden ze de nieuwe grens laten onderzoeken. Helaas waren koloniale landmeters niet opgewassen tegen de moeilijke taak en moesten twee experts uit Engeland worden aangeworven.
Charles Mason en Jeremiah Dixon kwamen in november 1763 aan in Philadelphia. Mason was een astronoom die had gewerkt bij de Royal Observatory in Greenwich en Dixon was een gerenommeerd landmeter. De twee hadden samengewerkt als een team voorafgaand aan hun toewijzing aan de koloniën.
Na aankomst in Philadelphia was hun eerste taak het bepalen van de exacte absolute locatie van Philadelphia. Vanaf daar begonnen ze de noord-zuidlijn te onderzoeken die het schiereiland Delmarva verdeelde in de eigenschappen Calvert en Penn. Pas nadat het Delmarva-gedeelte van de lijn was voltooid, bewoog het duo om de oost-west lopende lijn tussen Pennsylvania en Maryland te markeren.
Ze bepaalden precies het punt vijftien mijl ten zuiden van Philadelphia en omdat het begin van hun lijn ten westen van Philadelphia lag, moesten ze beginnen met hun meting ten oosten van het begin van hun lijn. Ze richtten een kalksteenbenchmark op hun vertrekpunt op.
Reizen en onderzoeken in het ruige "westen" was moeilijk en langzaam. De landmeters hadden te maken met veel verschillende gevaren, een van de gevaarlijkste voor de mannen zijn de inheemse indianen die in de regio wonen. Het duo had inheemse Amerikaanse gidsen, hoewel het onderzoeksteam eenmaal een punt 36 mijl ten oosten van het eindpunt van de grens bereikte, vertelden hun gidsen hen dat ze niet verder moesten reizen. Vijandige bewoners zorgden ervoor dat het onderzoek zijn einddoel niet bereikte.
Dus op 9 oktober 1767, bijna vier jaar nadat ze met hun onderzoek begonnen, was de 233 mijl lange Mason-Dixon-lijn (bijna) volledig onderzocht..
Meer dan 50 jaar later kwam de grens tussen de twee staten langs de Mason-Dixon-lijn in de schijnwerpers met het Missouri-compromis van 1820. Het compromis vestigde een grens tussen de slavenstaten in het zuiden en de vrije staten in het noorden (maar zijn scheiding van Maryland en Delaware is een beetje verwarrend omdat Delaware een slavenstaat was die in de Unie bleef).
Deze grens werd de Mason-Dixon-lijn genoemd omdat deze in het oosten begon langs de Mason-Dixon-lijn en westwaarts liep naar de Ohio-rivier en langs de Ohio naar zijn mond aan de Mississippi-rivier en vervolgens westwaarts langs 36 graden 30 minuten noordelijk.
De Mason-Dixon-lijn was zeer symbolisch in de hoofden van de mensen van de jonge natie die worstelen om slavernij en de namen van de twee landmeters die het creëerden zullen steeds meer worden geassocieerd met die strijd en de geografische associatie.